在液相色譜的流動相里常加少量甲酸（或甲酸銨、甲酸鈉等緩沖鹽），主要為以下目的：

調節pH并形成弱酸環境，保持酸性化合物質子化或壓制堿性溶質的電荷變化，從而改善峰形、減少拖尾，提升重現性。甲酸揮發性好，不會像磷酸等造成殘留。

配合LC?MS檢測：甲酸及其揮發性鹽容易在真空中去除，避免污染離子源；同時為分析物提供可控的質子來源，提高正離子模式的響應或穩定化負離子模式的脫質過程。

抑制金屬配位：微量金屬可能與某些化合物形成絡合導致尾峰，弱酸環境能降低這種影響。

用于反相HPLC中改善溶解性與抑制游離硅醇基，特別適合對酸性或弱堿性分子的常規分析；在LC?MS常選 0.1% 甲酸（體積比），有時與少量甲酸銨（1–10?mM）配合使用形成緩沖。

相比醋酸等，甲酸有較低的紫外吸收背景（220 nm以上較弱），對UV檢測干擾更小；而且高純甲酸便于制備批次一致的移動相。

在方法開發時要注意：甲酸是弱酸，在強堿性分析物或需要更佳緩沖容量的場合可能不適用，可改用磷酸鹽緩沖等；選擇的甲酸濃度通常在0.05–0.5%之間，需結合目標化合物pKa、檢測方式（特別是MS）和柱耐受的pH范圍優化。